本发明公开了一种用于16S rDNA可变区定量测序文库构建的接头元件及文库构建方法。
首先，将双链DNA片段进行平末端修复、5’末端添加磷酸基团、3’末端添加腺嘌呤A，通过连接反应，在处理的DNA片段上连接接头元件，该接头元件为两条互补配对的DNA寡核苷酸链，其中一条链的序列从5’到3’依次为固定序列FS、可变序列VS、铰链序列B，3’末端为一个突出的碱基T；与另一条互补序列形成一端具有单个突出碱基T的双链结构。
所述接头元件为含有不同随机排列组合核苷酸序列的可变序列VS的双链DNA的混合物。
采用接头元件可对细菌16S rDNA的可变区构建定量测序文库，定量检测样品中的微生物、实现细菌株系的鉴定。

吴启家 王琳 贾晓 吴志坤

武汉康测科技有限公司

430000 湖北省武汉市东湖高新区高新大道666号光谷生物城C1栋

本发明公开了一种用于16S rDNA可变区定量测序文库构建的接头元件及文库构建方法。
首先，将双链DNA片段进行平末端修复、5’末端添加磷酸基团、3’末端添加腺嘌呤A，通过连接反应，在处理的DNA片段上连接接头元件，该接头元件为两条互补配对的DNA寡核苷酸链，其中一条链的序列从5’到3’依次为固定序列FS、可变序列VS、铰链序列B，3’末端为一个突出的碱基T；与另一条互补序列形成一端具有单个突出碱基T的双链结构。
所述接头元件为含有不同随机排列组合核苷酸序列的可变序列VS的双链DNA的混合物。
采用接头元件可对细菌16S rDNA的可变区构建定量测序文库，定量检测样品中的微生物、实现细菌株系的鉴定。