一种马氏巨球菌外源基因表达载体及其构建方法和引物
申请人信息
- 申请人:深圳大学; 深圳未知君生物科技有限公司
- 申请人地址:518000 广东省深圳市南山区粤海街道南海大道3688号
- 发明人: 深圳大学; 深圳未知君生物科技有限公司
专利详细信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 专利名称 | 一种马氏巨球菌外源基因表达载体及其构建方法和引物 |
| 专利类型 | 发明申请 |
| 申请号 | CN202311692450.7 |
| 申请日 | 2023/12/8 |
| 公告号 | CN117625599A |
| 公开日 | 2024/3/1 |
| IPC主分类号 | C12N15/11 |
| 权利人 | 深圳大学; 深圳未知君生物科技有限公司 |
| 发明人 | 刘雪; 邓丽瑜; 罗鸣越; 何玉张; 朱宁; 谭验 |
| 地址 | 广东省深圳市南山区粤海街道南海大道3688号; 广东省深圳市南山区西丽街道松坪山社区朗山路13号南门西侧清华信息港科研楼10层1007室 |
摘要文本
深圳大学; 深圳未知君生物科技有限公司取得“一种透气窗帘布”专利技术，本发明公开了一种马氏巨球菌外源基因表达载体及其构建方法和引物，涉及基因工程领域。该方法包括：基于PacBio三代全基因组测序的甲基化修饰位点分析结果，在全基因组序列信息中检索马氏巨球菌的甲基转移酶，人工合成甲基转移酶的核酸片段并在E.coli DB24中表达，获得可表达马氏巨球菌甲基转移酶的E.coli DB24工程菌株；对NCBI数据库中及内部测序获得的巨球菌属的基因组数据进行预测分析，查找质粒序列并预测马氏巨球菌的复制元件，人工合成获得包含复制子在内的质粒骨架；将质粒骨架转入E.coli DB24工程菌株中，对质粒进行甲基化修饰；通过电转化将质粒转入菌株，获得用于马氏巨球菌外源基因表达的质粒载体。通过该方法可获得用于马氏巨球菌外源基因表达的质粒载体。
专利主权项内容
1.用于构建马氏巨球菌外源基因表达载体的引物，其特征在于，包括获得质粒pDB24-Tn7-Plac-methyls所使用的四对引物：DB24-Tn7-F：5’-CACCTGCCTCGCGCCGCAAAC-3’；DB24-Tn7-R：5’-AGCTCATGCATGATCGAATT-3’；ssD-methyl-F：5’-GAGGCAGGTGAGGAGGAAAATTATTGGGAGAAGTTGATTTGAGTGAG A-3’；ssD-methyl-R：5’-TAATTTTCCTCCTCACCTGCCTCATCACTCGATTTCACCGTCGA-3’；Eco-methyl-F：5’-GAGGCAGGTGAGGAGGAAAATTAATGTTAGAATATGTAGTGCGTCAG AC-3’；Eco-methyl-R：5’-TTTGCGGCGCGAGGCAGGTGCTAACTGTGCGAGGAAGAGC-3’；LacI-F：5’-AATTCGATCATGCATGAGCTAGATCTTTAGGAATTCTTTCAGCTCA-3’；LacI-R：5’-AATTTTCCTCCTCACCTGCCTCAGTATCTTGTTATCCGCTCACA-3’；和/或包括获得质粒骨架pXA511-mini所使用的三对引物：repM-F：5’-CGTTTTACAACGTCGTGACTGGGGAGTGCCTGGAACAAGAGTT-3’；repM-R：5’-AATAGCAACTCCTTCCGCTT-3’；cat-F：5’-AAGCGGAAGGAGTTGCTATTGAGCGCTTTTGAAGCTAATTC-3’；cat-R：5’-TTGGGTAACGCCAGGGTTTTGTTGTTACTAGTGCTTGGATTCTCAC-3’；pUC19-F：5’-AAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAA-3’；pUC19-R：5’-CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG-3’。